衰老大鼠主动脉增龄性改变的比较蛋白质组学研究
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【摘 要】目的研究老年大鼠主动脉与衰老相关的蛋白质,为进一步探讨衰老机制提供依据。方法建立衰老大鼠模型,取成年(9周)和老年(12个月)wistar_Kyoto(WKY)大鼠和同龄的自发性高血压大鼠(SHR),观察血压变化情况,采用苏木伊红(HE)染色观察主动脉形态学改变,应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)多重化学标记串联质谱技术鉴定差异蛋白,同时应用实时定量聚合酶链反应(PCR)、免疫印迹(Western-blot)检测部分差异蛋白。结果老年组中SHR大鼠的平均收缩压比WKY大鼠高出97.1%(t=39.00,P〈0.05);成年组中SHR大鼠的平均收缩压比WKY大鼠高出5.40(t=3.64,P〈0.05)。HE染色结果显示老年WKY组和老年SHR组大鼠主动脉出现衰老改变,且老年SHR组更明显。质谱分析鉴定了7个与衰老相关的差异蛋白,分别是前纤维蛋白1(Profilin—1)、前层蛋白A(Prelamin—A)、热休克蛋白70(HSP70)、肌酸激酶M(CK—M)、腓骨蛋白5(Fibulin-5)、真核翻译起始因子5A_1(eIF5A)、抑制素蛋白(Prohibitin)。实时定量PCR结果显示,与成年组相比,WKY与SHR老年组中Prelamin—A的mRNA表达均升高,分别为0.45±0.04与0.15±0.01、0.78±0.06与0.34±0.02(t值分别为12.67、12.06,均P〈0.01)。与成年组相比,WKY与SHR老年组中Prohibitin mRNA表达降低,分别为1.34±0.05与1.01±0.06、1.24±0.05与0.88±0.08(t值分别为7.41、7.09,均P〈0.01)。Westernblot检测结果显示,与成年组相比,WKY与SHR老年组中Profilin-1的蛋白表达均升高,分别为9.12±0.40与20.76±0.80、16.84±0.50与55.16±0.90(t值分别为22.55、64.46,P〈0.01),且Profilin-1在SHR老年组的蛋白表达比WKY老年组的高,分别为55.16±0.90与20.76±0.80(t=49.49,P〈0.01)。结论通过比较蛋白质组学方法鉴定老�